稳定株构建
日期:
2019-09-08 16:11
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1.实验原理:
将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体通过慢病毒包装被感染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含抗性基因进行筛选。得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。 shRNA细胞株构建原理:短发卡RNA(shRNA)是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA(sIrna,19-21个核苷酸的RNA双链)的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA(shRNA)序列并将其克隆岛特定载体上。短发夹RNA是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子,可通过RNA干扰来抑制基因的表达。 过表达细胞株构建原理:通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。
2.流程:
3.结果图示 :
DU145 细胞荧光图 PC3细胞荧光图
4.客户提供:
产品:细胞株(冻存管/培养细胞),目的基因的质粒/菌株,目的蛋白抗体 数据信息:目的基因的NIBI登录号、目的基因的载体信息、细胞培养信息
5.辉园苑提供:
产品:细胞株两管冻存管或一瓶T-25活细胞 数据信息:基本实验步骤,细胞株构建报告,QPCR鉴定报告,WB鉴定报告